Люминесцентная микроскопия
Оптический метод изучения туберкулезных возбудителей, которые окрашиваются флюорохромами и благодаря этому начинают светиться под ультрафиолетом. Для этого обследования применяются специальные приборы, которые состоят из элемента создающего ультрафиолет и из системы фильтров.
Многие микробы не имеют своей люминесценции, поэтому имеются различные методы их окраски для изучения на специальном приборе. Один из способов — это флюорохромирование, т.е. окраска интенсивно разведенными флюорохромами. Такая методика применяется для бактериоскопического исследования возбудителей туберкулеза.
Как проводится этот анализ?
Проведение ПЦР при туберкулезе проводится в несколько этапов. Рассмотрим каждый детально.
- Сначала молекулы ДНК делятся на компплементарные нити путем нагревания до высоких температур.
- Потом в полученный материал вводят праймеры. Один их тип комплементарен ДНК 1-ой цепи (ее началу), второй ДНК 2-ой (ее концу). Тут же добавляют состав из четырех типов DDNTP. Далее происходит соединение всех компонентов.
- Состав нагревается и в него вводится термостабильная полимераза ДНК. После исследуемые пробы охлаждаются. Все это происходит в термостатах (термальных циклерах).
- В конце специалист оценивает полученные результаты. Это делается с использованием специального геля при светящихся лучах ультрафиолета. Электрофореграмму, которую получают, анализируют и результат фиксируют.
Оборудование, с помощью которого проводится анализ дорогостоящее и присутствует не везде.
Проба Манту
Выявление туберкулеза, как правило, у детей, происходит с помощью пробы Манту. Ее суть заключается в том, что под кожу вводятся антигены возбудителя. Таким образом, проба Манту вызывает реакцию, если туберкулезная инфекция присутствует в организме. В таком случае место укола отекает, краснеет и воспаляется.
Они являются возбудителем туберкулеза. Проба Манту обычно делается в предплечье. Организм распознает туберкулин в качестве инфекции. В случае, когда иммунитет знаком с ней, на месте укола появляется очаг воспаления.
Еще одним вариантом является проба Пирке. Ее суть состоит в накожном нанесении туберкулина. Данное вещество само по себе является безопасным, поэтому не способно причинить вреда человеку. Но туберкулин отличается высокой аллергенностью, за счет чего способен вызывать соответствующие реакции.
До того как будет оценен результат пробы Манту, запрещено всячески воздействовать на место укола. Таким образом, его нельзя мочить, чесать, а также смазывать зеленкой, йодом и другими антисептическими препаратами. Не рекомендуется накладывать лейкопластырь и повязки, что практикуют некоторые родители, чтобы ребенок не трогал место инъекции. Все это может отрицательно сказаться на результатах и привести к установке неточного диагноза.
Что такое анализ мочи методом ПЦР?
Полимеразная цепная реакция руководствуется принципом молекулярной биологии. Чтобы исследовать урину (или другой биоматериал) используют специальные ферменты. Они могут копировать ДНК микроорганизмов. Специалисты сравнивают материал с имеющейся базой и определяют, есть ли заражение. В случае положительного ответа выясняется степень инфицирования и тип возбудителя.
Тут важна точность, поэтому работники лаборатории должны иметь соответствующие знания и навыки.
Кроме туберкулеза с помощью ПЦР диагностируют и другие инфекционные болезни (гепатит, ИППП, ВИЧ, кандидоз, боррелиоз и др.).
Некоторые родители уверены, что такой метод можно использовать вместо Манту, но это не так. Даже его высокоэффективность не может заменить пробу, которая является утвержденной и обязательной во всех дошкольных и школьных учреждениях. Предоставления в детский сад или школу результата ПЦР может быть недостаточно для допуска ребенка в детский коллектив.
Анализ мочи и слюны
Для определения туберкулезной палочки у детей и взрослых проводится бактериологический посев мочи или ПЦР-исследование. Однако ее отсутствие в моче не значит, что человек здоров. При субкомпенсированном и декомпенсированном туберкулезе микобактерии зачастую не обнаруживаются.
Также при подозрении на туберкулез обязательно назначается общий анализ мочи.
Сдавать можно только утреннюю порцию. В течение ночи мочевой пузырь заполняется мочой и данные, полученные при ее исследовании, будут самыми точными. Чтобы сдать анализ мочи, нужно предварительно провести тщательную гигиену интимных мест. Моча собирается в специальную емкость, которую до сдачи в лабораторию следует хранить в прохладном месте. За день до сбора, во избежание искажения результатов, не рекомендуется употреблять продукты с яркой окраской и острые блюда.
В ОАМ при туберкулезе легких можно обнаружить различные изменения. Одним из таких нарушений является лейкоцитурия – содержание в мочи большого количества лейкоцитов. Кроме того, может наблюдаться эритроцитурия – выделение красных кровяных телец с мочой, и протеинурия – наличие в мочи белка.
Также чтобы определить туберкулез, проводится исследование слюны. Оно делается у детей и взрослых при подозрении на любые легочные болезни. Сбор слюны проводится в специальный сосуд. Это можно сделать дома или в лечебном заведении, в котором будет проводиться исследование.
Для получения достоверного результата за 4 часа до сбора не рекомендуется чистить зубы, кушать, пользоваться ополаскивателями и даже пить воду. За 24 часа до сдачи анализа слюны на туберкулез следует ограничить курение и употребление спиртных напитков. Эти вредные привычки также могут исказить результат.
Анализ слюны заключается в капании на ее мазок специального реагента, под действием которого слюна может изменять окраску. Если цвет поменялся, это указывает на наличие в организме микобактерии, если нет – человек не заражен палочкой Коха.
Туберкулез – очень серьезное заболевание, которое без своевременного и правильного лечения может закончиться летальным исходом.
Лабораторные анализы при туберкулезе помогают определить наличие микобактерии в организме. Для установления точного диагноза они проводятся одновременно с другими методами обследования.
- Анализ крови – определяется уровень лейкоцитоза и СОЭ. Последний показатель при туберкулезе значительно превышает нормы (более 40 мм/ч).
- Выявление антител с помощью иммуноферментных тестов.
- Выявление в сыворотке иммуноглобулинов класса G – это типоспецифические к микобациллам антитела. Метод не служит поводом для окончательной постановки диагноза. В крупных городах, с высокой плотностью населения, серологический метод не является индикатором инфицированности человека.
- Всемирная организация фтизиатров считает, что обязательным критерием для верификации является определение микобактерий в мокроте. Положительным считается 5 и более микобактерий во взятой пробе.
- Обязательным является определение чувствительности бактерий к антибиотикам, что позволяет выбрать правильную схему лечения и комбинацию антибактериальных препаратов. Это метод не быстрый, потому что основывается на посеве культуры в питательные среды. Занимает он больше двух недель. До этого момента пациент лечится по стандартной схеме. После получения данных анализа, тактика может быть корректирована, и выбран другой антибиотик.
- Реакция Манту – универсальный метод массового выявления инфицированности микобактериями, который применяется в школах. Метод основан на внутрикожном введении ослабленных бацилл. Положительным считается увеличение папулы до 5 мм и более. Кожная гиперреакция на пробу Манту – повод для дальнейшей сдачи анализов на туберкулез.
С момента изобретения рентгеновских лучей, основным методом диагностики легочных болезней стал метод предварительной флюорографии. Рентгеноскопия – важнейший способ определения локализации патологического очага. Если инфильтрат находится в трудно диагностируемых рентгеном местах, необходимо томографическое обследование, которое позволяет определить четкие границы, пораженных тканей.
Типы анализов крови на антитела к туберкулезу
Существуют более точные, углубленные чем ОАК, методы исследования крови, позволяющие выявить туберкулез. Как определить по таким анализам крови, есть ли у вас болезнь, рассмотрим далее.
Постановка объективного диагноза возможна при использовании подходов полимеразной цепной реакции (ПЦР) и иммуноферментного анализа (ИФА).
Показывает ли метод ИФА наличие туберкулеза
При помощи ИФА выявляется наличие у пациента болезнетворных антител. Способ удобен, так как позволяет одновременно обследовать большое количество образцов. При этом он обладает малой чувствительностью и рекомендуется к применению в районах с низким уровнем заболеваемости.
Какие изменения выявляет метод ПЦР
Метод ПЦР относится к самым результативным. Он используется для выявления заболевания, определения степени тяжести и ремиссии при лечении путем нахождения ДНК микробактерий.
ПЦР используют для:
- обнаружения прогрессирующей палочки Коха;
- теста на выявление внелегочного туберкулеза;
- быстрого установления очагов локализации инфекции;
- диагностики рецидивов болезни;
- мониторинга хода лечения.
И тот, и другой анализ крови на антитела к туберкулезу считаются достаточно надежными. Но существуют и другие.
Альтернативные методы анализа крови
Менее, чем ПЦР и ИФА распространен для выявления болезнетворных микробактерий метод Interferon Gamma Release Assays. Он может проводиться вместо туберкулиновой пробы. Реакция показывает образование гамма-интерферона в ответ на введение микробактерий. По результатам можно точно определить наличие инфекции.
Другим альтернативным способом исследования является QuantiFERON-TB Gold. Данный метод чаще всего применяется для проверки детей, у которых отмечаются сильные аллергические реакции на туберкулиновую пробу.
Важно! Оба метода не позволяют определить степень развития инфекции — активную или латентную. Лечащий врач определяет, какой из видов анализов крови будет использоваться
Чаще всего исследование проводится комплексно. Анализ крови при латентной форме туберкулеза вообще может не дать результатов
Лечащий врач определяет, какой из видов анализов крови будет использоваться. Чаще всего исследование проводится комплексно. Анализ крови при латентной форме туберкулеза вообще может не дать результатов.
Определение туберкулезной палочки
Микобактерии туберкулеза представляют собой палочки, длина которых не превышает 10 микрометров, то есть одну сотую миллиметра. Они неподвижны, не образуют капсулы и эндоспоры. Их существует множество видов. Особенности каждого вида зависят от питательной среды и со временем появившейся резистентности к некоторым препаратам. Возбудитель относится к низшим грибам и является неспороносным.
Туберкулезная микобактерия под микроскопом
Не всегда анализ крови дает полную картину болезни. Туберкулезные бактерии у детей или взрослых можно выявить при обследовании мочи. При этом наличие болезни можно определить тремя различными способами:
- Бактериоскопический;
- Бактериологический;
- Биологическая проба.
Показатели содержания кровяных телец в моче у детей отличаются от обычных. При беременности результаты исследований могут искажаться, так как на организм женщины приходится двойная нагрузка. Однако, обнаруженная в урине микобактерия является поводом для беспокойства, понадобится обследование.
Бактериоскопический – анализ мочи по Цилю-Нильсену
При данном исследовании берут не мочу, а осадок. Затем окрашивают по методу Циля-Нильсена. Но отрицательный результат не дает стопроцентной гарантии, что туберкулеза нет. Часто о наличии заболевания можно судить по очагам в легких и наличии сопутствующих туберкулезу недугов.
Порядок проведения анализа у детей и взрослых:
- Карболовый фуксин попадает в клетку через мембрану.
- После происходит обесцвечивание некислотоустойчивых структур за счет попадания H2SO4 и окрашивание метиленовым синим.
- В результате все клетки кроме микобактерии меняют свой цвет. Они становятся синими, а микобактерия — красной.
Бактериологическое исследование
Если бактерископический метод не выявил туберкулез почек и других органов мочеполовой системы, то производится данный тип исследования.
- Для этого три раза делают посев мочевой жидкости, взятой утром. Чтобы сделать анализ мочи пациента на туберкулез берут осадок со дна стаканчика. На питательной среде в случае присутствия микобактерий результат появится через две-шесть недель.
- При посеве на кровяную среду можно получить ответ через семь дней.
- В случае использования картофельной среды результат – через 30-45 дней.
- По результатам анализа врач может назначить больному антибиотики, способные нейтрализовать микобактерии.
Анализ по Нечипоренко
Помимо микобактерии признаком туберкулеза может служить превышенное содержание лейкоцитов и эритроцитов. Сейчас можно проверить содержание кровяных телец не сдавая анализ крови в стационаре. Исследование по Нечипоренко позволяет определить количество кровяных телец, которые содержит мочевая жидкость. Оно дает более точные результаты, чем общий анализ у детей или взрослых.
Более эффективный способ диагностики на туберкулез вместо манту – это биологическая проба. Для исследования используются морские свинки. Сдаваемый пациентом биологический материал вводят внутрибрюшинно или под кожу свинкам. Через несколько месяцев свинку можно использовать для точной диагностики. Нужно всего лишь выяснить, заразилась ли она. Можно поставить диагноз и раньше, взяв у животного пробу крови с туберкулином. Также морской свинке делают пункцию в димфоузлах. Уже после пяти дней после заражения обнаруживаются лимфодениты.
Подготовка к анализам
Требования, которые выполняют перед тем, как сдавать ОАМ (общий анализ мочи):
- используют полученную сразу после пробуждения среднюю порцию мочи;
- материал собирают в чистую емкость в количестве 50-100 мл;
- перед сдачей моют наружные половые органы без использования моющих средств;
- полученный материал доставляют в лабораторию не позднее 10-11 часов утра (менее 2 часов после сдачи анализа).
Сбор мочи на бактериоскопию и посев проводят по тем же правилам, но более жесткие требования предъявляют к контейнерам для мочи. Они должны быть строго стерильны, поэтому не рекомендуют трогать их внутреннюю поверхность и края, а после наполнения сразу закрывать крышку. До доставки в лабораторию собранный материал хранят в холодильнике.
Могут изменить показатели мочи и ее цвет: противотуберкулезные (рифампицин), мочегонные, противовирусные препараты, ацетилсалициловая кислота, витаминно-минеральные комплексы и пр.
Женщинам сдавать анализ необходимо в период отсутствия менструальных кровотечений.
Суть и методика проведения
Микобактерии туберкулеза относятся к низшим грибам и представляют собой палочки длиной не более одной сотой миллиметра. В анализе мочи их можно выявить тремя способами: бактериоскопическим, бактериологическим, с помощью биологической пробы.
-
Бактериоскопический (по Цилю-Нильсену). Суть метода заключается в том, что микобактерии не способны жить в кислотной среде, поэтому для их выявления используются специальные реактивы, которые окрашивают все неустойчивые структуры. Сначала их обесцвечивают с помощью серной кислоты, после чего вводят раствор метиленового синего. Благодаря этому все структуры и клетки приобретают ярко-синий цвет, за исключением микобактерии, которая становится малиново-красной.
Минус данного способа заключается в том, что мочу достаточно сложно очистить от посторонних примесей, из-за чего точность исследования снижается (для повышения диагностической ценности исследования мочу берут с помощью катетера).
-
Бактериологический. Еще один способ выявления возбудителей туберкулеза в анализе мочи — бактериологический. Для выполнения берется осадок мочи, после чего его культивируют на питательной среде.
Минус метода — достаточно долгое ожидание результата. Точные сроки варьируются в зависимости от вида среды, которая применяется для культивации биоматериала. При использовании кровяной среды результат придется ждать около 7 дней, картофельной — 30-45 дней.
Фото 2. Результат бактериологического теста: в чашке Петри выращены бактерии, которые находились в осадке мочи пациента.
-
Биологическая проба. Наиболее чувствительный метод выявления микобактерий, который часто используется вместо реакции Манту.
Для проведения исследования морской свинке вводят образец мочи, через несколько месяцев животное можно использовать для точной диагностики. Чтобы поставить диагноз раньше, можно взять у свинки туберкулиновую пробу.
Точность бактериоскопического и бактериологического анализа составляет около 80%, точность биологической пробы — 100%.
Для выявления туберкулеза мочеполовой системы используется не только бактериологический, но и общий анализ мочи. Показателями заболевания являются не только микобактерии, но и характерные гвоздевидные лейкоциты, белок (протеинурия), неспецифические бактерии, повышение концентрации эритроцитов. Кислая реакция образца биоматериала наблюдается примерно в 60% случаев, поэтому не может считаться точным критерием диагностики.
Справка. Наиболее информативным показателем туберкулеза, по мнению большинства специалистов, является классическая триада: пиурия (наличие гноя в образце), альбуминурия (или следы белка), а также кислая реакция.
Расшифровка результатов
В норме микобактерии туберкулеза в моче не обнаруживаются, поэтому референсные значения анализа будут выглядеть следующим образом:
- микробактерии туберкулеза не обнаружены — отрицательный результат;
- в моче обнаружены МБТ — положительный результат.
Положительный результат практически всегда свидетельствует о поражении почек или мочевыводящих путей, а отрицательный может говорить как об отсутствии заболевания, так и о ложноотрицательном результате. Если у больного был контакт с носителем заболевания или отмечаются специфические симптомы туберкулеза, ему необходим комплекс дополнительных исследований.
Что делать дальше
При превышении размера 20 мм необходимо сдать ряд анализов в тубдиспансере. Если положительный Диаскинтест у ребенка, то необходимо обследоваться у врача-фтизиатра. Назначают такие анализы, как бактериологический посев мочи, анализ крови, КТ. Взрослым делают рентген или снимок легких.
При наличии кашля исследуют мокроту. Если при осмотре тела обнаружены увеличенные лимфатические узлы, то направляют на УЗИ. В результате могут отсутствовать какие-либо отклонения от нормы.
При отказе от лечения ставят на учет и повторяют тест 1-2 раза за полгода. Если Диаскинтест отрицательный, значит иммунная система справилась с микобактериями. По отзывам пациентов это лучший подкожный тест, который хорошо переносится организмом. В отличие от томографии и других видов исследования, данный тест не приводит к облучению организма. Исключено заражение туберкулезной инфекцией после его проведения.
В редких случаях может ухудшиться общее самочувствие. Иногда повышается температура или возникают переходящие головные боли. Реакция Манту бывает большой и при отсутствии в организме возбудителей туберкулеза. Такое значение случается после того, как была сделана прививка БЦЖ. Если результаты Диаскинтеста положительные, а анализы и рентген хорошие, то необходимо пройти тестирование повторно. Такое случается у пациентов после лечения туберкулезной инфекции. Необходимо обследоваться дополнительно.
Какие методы применяют вместо анализа мочи: проба Манту, Пирке, ПЦР, ИФА
Сегодня существует множество способов диагностики туберкулеза, но ни один из них не способен выявить заболевание со 100%-ной точностью. По этой причине для постановки диагноза используется комплекс методик, который включает анализы крови, мокроты, туберкулиновые пробы и аппаратные методы исследования (флюорография, рентгенография).
Наиболее дешевым и распространенным методом выявления туберкулеза являются туберкулиновые пробы Манту и Пирке. Их основной недостаток — высокая вероятность получения ложноположительных и ложноотрицательных результатов.
Анализы крови (ПЦР, ИФА) обладают точностью и специфичностью, но при этом имеют достаточно высокую стоимость и проводится далеко не во всех лабораториях.
Флюорография, рентгенологическое исследование и анализ мокроты используются для диагностики легочной формы заболевания и практически неинформативны при выявлении внелегочного туберкулеза.
Справка. Наиболее точным и эффективным методом диагностики всех форм туберкулеза на сегодняшний день является метод ПЦР, или полимеразной цепной реакции; для выявления внелегочной формы — биологическая проба.
Подготовка к процедуре
Перед взятием анализа пациенту необходимо провести подготовительные мероприятия. Они зависят от того, какой материал будет сдаваться:
Если необходимо сдать кровь, должна быть подготовлена стерильная пробирка. В нее добавляется антикоагулянт – специальный раствор, препятствующий свертыванию крови
В него помещается собранный материал и осторожно смешивается. Кровь собирают одноразовым шприцем из вены.
Процедура проводится утром натощак
Хранится кровь в холодильнике не более пяти часов. Если пренебречь этим правилом, результаты анализа могут быть неточными.
За неделю до сдачи биоматериала следует прекратить прием любых лекарств.
Нельзя сдавать кровь после приема алкогольных напитков.
При наличии хронических инфекционных или воспалительных заболеваний процедура переносится до тех пор, пока человек полностью не выздоровеет.
Обязательно во время процедуры необходимо соблюдать по возможности максимальную стерильность
Поэтому важно сдавать анализы только в проверенных клиниках под руководством опытного специалиста. Следует помнить, что минимальное попадание посторонних микроорганизмов может дать неправильный результат
Во избежание этого, доктор может назначить повторное исследование.
Подготовка к анализу
Как сдавать мочу? Чтобы урина не стала причиной неверного ответа, нужно осуществить правильный ее сбор. Немаловажна подготовка.
Если анализ планируется взрослому человеку, то за 1-2 суток до него нужно забыть о половых контактах.
Важно сказать врачу об антибактериальной терапии (если таковая была за последние недели). Нужно выждать не менее месяца и только потом приступать к обследованию
Любые медикаментозные препараты повлияют на результат анализа.
Лучшее время для сбора – утро. Предварительно не допускается употребление пищи и каких-либо напитков.
Половые органы предварительно не обмываются.
Важно приобрести специальный вакуумный набор, в который будет собираться моча. Поместить ее в обычную баночку, а потом перелить не выйдет. Вследствие этого в урину попадут бактерии или вирусы из внешней среды, которые помешают получить достоверный результат. Контакта с внешней средой нужно избегать. Специальный набор состоит из стерильной баночки с крышкой, пробирки и трубки.
В баночку человек опорожняет мочеиспускательный пузырь. Важно собрать первую порцию урины.
После контейнер закрывается и вставляется пробирка. Она наполнится содержимым самостоятельно. Повлияет на это отрицательное давление.
После наполнения пробирки контейнер и трубка утилизируются.
Полученный биоматериал отвозится в лабораторию, где проведут сам анализ. Доставляется только пробирка с имеющейся в ней мочой.
Если обследуемый по каким-то причинам не в состоянии сам собрать мочу, ему придет на помощь специалист из клиники. Специально обученные люди приедут со всем необходимым и сделают все без ошибок.
В чем недостатки
Этот метод диагностики является скорее исключительным, чем закономерным, для этого имеются причины
В первую очередь во внимание берётся дороговизна метода. Оборудование дорого стоит, государственные поликлиники не имеют возможности его приобрести из-за высокой цены, но большинство платных лабораторий оборудование имеют, анализ в них делается. Существующие недостатки:
Существующие недостатки:
- Метод обнаруживает убитые бактерии, которые погибли после лечения, при этом ПЦР показывает положительный результат. Сразу после химиотерапии проводить исследование нет смысла, так как результат будет недостоверным;
- Туберкулезные микобактерии подвержены мутации, что приводит к неэффективности способа, при этом нить ДНК не может последовательно синтезироваться.
Среда для исследования должна тщательно выбираться, взятие крови или мочи происходит только в том случае, если есть подозрение на заражение. Нельзя взять мокроту для исследования, если подозревается туберкулез костей. В этой ситуации диагностика будет неверной.
Кровь и моча больного туберкулезом для изучения на ПЦР берется редко, выявление болезни таким способом сомнительно. В этих биосредах возбудитель определяется только при сепсисе, либо в случае . Локальные формы встречаются наиболее часто, при них кровь и моча могут оставаться без изменений. Чаще всего для изучения берется мокрота.
Определение симптомов
На первом этапе, когда больной только обратился за медицинской помощью, врач должен обнаружить признаки заболевания. К клиническим проявлениям туберкулеза относится затяжной кашель, кровохарканье, повышение температуры тела, потливость, повышенная утомляемость и снижение работоспособности
На эти симптомы важно обратить внимание, поскольку они свидетельствуют о возможном развитии недуга. Кроме того, на данном этапе следует выяснить характеристики эволюции заболевания. Врач расспрашивает больного о том, был ли у него контакт с людьми, у которых установлен диагноз «туберкулез»
Врач расспрашивает больного о том, был ли у него контакт с людьми, у которых установлен диагноз «туберкулез».
Вывод
Анализ мочи на ПЦР – методика, которую можно применять всем без исключения. Она не рекомендована малышам, так как результат может быть ложным
Важно правильно подготовиться к анализу и собрать материал. Сбор осуществляется в домашних условиях самостоятельно, допускается помощь специалиста и забор в условиях клиники (при необходимости)
Нельзя помещать урину в контейнеры, непредназначенные для анализа. Тут приобретается специальный набор. Проводят саму диагностику квалифицированные работники лаборатории, придерживаясь всех правил. Без наличия дорогостоящего оборудования исследовать урину на ПЦР будет невозможно.
Методика эффективна и способна выявить туберкулез даже тогда, когда количество микобактерий в организме минимально. Но, несмотря на это пробу Манту им заменить нельзя. Подобным способом целесообразно подтверждать диагноз или контролировать, нет ли рецидива.