Правила определения чувствительности
Проявляемая микроорганизмами устойчивость к антибактериальной терапии может быть врожденной или приобретенной. При врожденной резистентности бактерия нейтрализует действие препаратов с помощью ферментов либо же имеют непроницаемую по отношению к ним бактериальную мембрану. Обычно микроорганизм обретает устойчивость к ранее эффективным антибиотикам в результате мутаций.
Определение чувствительности к антибиотикам бактерий всегда проходит в несколько этапов:
- Осуществляется забор материала.
- Доставляется в лабораторию.
- Проводится посев на питательные среды.
- Выделяется вид и штамм микроорганизма.
- Изучается восприимчивость к антибиотикам.
Для определения чувствительности патогенных бактерий используют методы диффузии и разведения, провести которые можно различными способами.
Методы диффузии
Для определения чувствительности к антибиотикам таким способом, используют:
- Диски. Метод относится к качественным и является наиболее используемым. На среду густо высеивают изучаемую культуру. Обычно пользуются рыбным бульоном, агар-агаром, натрий фосфат двузамещенным. Затем сверху располагают бумажные диски в количестве не более 6 штук, соблюдая между ними дистанцию в 2 см. Инкубация в термостате длится в течение суток, при температуре 37 °С. Оценку для данного определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам дают по зоне подавления роста возле дисков. Ее появление говорит о чувствительности микробов к антибиотикам или же об их умеренной резистентности, что зависит от диаметра зоны. Ее отсутствие указывает на устойчивость возбудителей к изучаемым антибактериальным препаратам.
- Е-тест проводят с помощью специальной полоски. Выполняется тест по аналогии с предыдущим. На полоске имеются разметки, указывающие на минимальное или высокое содержание антибиотика.
Рассмотренные методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам имеют как преимущества, так и недостатки. Так, не все антибактериальные препараты можно использовать в исследованиях, поскольку некоторые из них имеют плохо диффундирующую способность. Это касается таких антибиотиков, как полимиксин и ристомицин.
Методы разведения
Данным способом определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проходит с использованием жидкой среды или агара. Методы разведения позволяют установить минимальное содержание антибактериального препарата, при котором он подавляет рост изучаемых патогенных бактерий.
Первоначально изготавливается основной раствор, из которого затем производят все остальные. Затем к ним добавляют 0,1 мл изучаемого возбудителя. В конце оставляют пробирку для контроля.
Исследуемые пробирки подвергают инкубации при температуре 37 °С на протяжении 18–24 часов.
Оценивают такое определение чувствительности бактерий к антибиотикам при помощи таблиц. Все изучаемые растворы сравнивают с контрольным. Отсутствие помутнения в исследуемых пробирках свидетельствует об успешном ингибирующем воздействии данной концентрации препарата на рост бактерий.
Сохраняющееся помутнение, наоборот, указывает на неспособность антибиотика подавить жизнедеятельность микроорганизма.
С помощью данных методов можно выявить дозировку антибиотика, которая проявит наибольшую эффективность в лечении и не вызовет при этом в дальнейшем у микроорганизмов резистентности.
Показатель чувствительности по МБК
Иногда проведенных результатов оказывается недостаточно. В таких случаях стоит определить минимальную бактерицидную концентрацию (МБК). Данный показатель отражает минимальное количество антибактериального препарата для ликвидации микробов практически на 100% на протяжении некоторого времени.
Методика с применением дисков
Исследование чувствительности бактерий к антибактериальным препаратам методом дисков заключается в засевании исследуемой культуры бактерий на среду АГВ либо питательный агар. Затем на засеянный участок при помощи пинцета располагают специальные диски из бумаги, содержащие разные дозы лекарственных средств. При температурном режиме 37°С выжидают сутки, одновременно оценивая зоны задержки роста культуры.
Для наиболее точных результатов рекомендуется применять стандартные питательные среды и диски. Методика дисков не отличается 100% достоверностью. Большей информативностью обладает метод серийных разведений.
Серийные разведения и их значение
Метод серийных разведений позволяет определить минимально возможную концентрацию антибактериального препарата, которая угнетает рост и размножение микробов. Начинают с приготовления основного раствора с содержанием специального растворителя и медикаментозного средства. Затем к каждому разведению прибавляют по 0,1 мл культуры бактерий (до 107 микробов в 1 мл), одна из них (последняя) – контрольная. Затем также выжидают сутки при температуре 37°С. Все пробирки мутнеют (кроме контрольной). В результате сравнения степени помутнения с эталоном определяют, какая бактерия подлежит устранению.
Оценивают результаты метода серийных разведений соответственно таблицам пограничных значений. При применении метода серийных разведений определяют группы чувствительных, умеренно устойчивых и устойчивых бактериальных микроорганизмов.
