Метод ПЦР
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) относится к молекулярно-генетической диагностике. С ее помощью выявляется не бактерия, а ее специфическая ДНК. Даже при малом количестве, в случае выздоровления или бессимптомного носительства метод позволяет с достаточной точностью связать изменения в организме с действием хеликобактер.
Длительность анализа экспресс-методом 5–6 часов, обычным — 2–3 суток
Методика рассчитана на искусственный синтез отдельных частей ДНК, удвоение и построение цепочки из 30 циклов. Процесс не происходит в случае отсутствия малейших остатков биоматериала. Для реакции необходим прибор ампликатор. Полимераза — фермент, ускоряющий процесс.
ПЦР кала назначают для подтверждения роли хеликобактерии в патологии и определения целесообразности специфической терапии:
- при эрозиях и язвах в желудке, пищеводе и двенадцатиперстной кишке;
- желудочно-пищеводном рефлюксе (заброс содержимого в обратном направлении);
- атрофическом поражении слизистой желудка;
- полипах;
- опухолях желудка;
- выявлении наследственной предрасположенности в случае наличия у родственников злокачественных опухолей органов пищеварения;
- контроле за результатами терапии антибиотиками.
Преимуществами ПЦР кала можно считать:
- высокую чувствительность и специфичность (соответственно определяются в 94% и 100%), реакция бывает положительной даже при наличии 10 бактерий;
- простоту проведения;
- безопасность для пациента, отсутствие травматичности при заборе материала;
- возможность определения ДНК как в спиралевидных, так и в кокковых формах хеликобактерии;
- выделение и изучение различных генетических модификаций, штаммов.
Результат редко выдает ложноположительную информацию при отсутствии инфицированности человека.
Недостатки исследования:
- не представляется возможность определения оптимального антибиотика по чувствительности;
- нет различий между протекающим острым заболеванием и остаточными явлениями после обострения, ДНК бактерий остаются в кале почти месяц после клинического выздоровления;
- чувствительность все-таки ниже, чем при исследовании биоптата из стенки желудка;
- сравнительно высокая стоимость;
- необходимость подготовки персонала и приобретения оборудования;
- положительная реакция в случаях загрязнения персоналом материала из чужого образца (контаминация извне).
ПЦР-лаборатория имеет усовершенствованную технику, позволяющую получить достоверные результаты диагностики
Как берут анализ на бактерию хеликобактер пилори
Если хотят диагностировать саму бактерию или её фрагменты – берут участок слизистой из желудка специальным прибором при проведении ФГДС. Врач определяет место пункции – это наиболее гиперемированные и отекшие участки внутренней желудочной стенки. Нельзя брать для исследования кусочек из дна эрозий или язв.
Если цель диагностики – профилактическое обследование или оценка эффективности лечения, можно применять неинвазивные методы: взять анализ крови, кала, провести дыхательный тест.
Кровь для исследования берут из вены, особой подготовки от пациента анализ не требует. Желательно сдавать кровь натощак, вечером допустим легкий ужин, не желательно переедать или употреблять жирную пищу.
Перед анализом кала 3 дня следует питаться правильно: не кушать продукты, содержащие большое количество красителей и консервантов, грубоволокнистой пищи, не принимать медицинские препараты, алкоголь.
Перед проведением дыхательного теста также важна подготовка. Нельзя кушать после 22.00 вечера накануне теста и утром. За два дня перед исследованием исключить все повышающие газообразование продукты и жидкости, способные с выдыхаемым воздухом повышать концентрацию СО2: капуста, бобовые, яблоки, сдоба, газировка. Нельзя употреблять спиртное и курить, использовать жевательную резинку.
От того, насколько сознательно отнесется пациент к подготовке к анализам, зависит их качество и результат. А значит последующее лечение и общее самочувствие.
Симптоматика
Хеликобактер пилори блокирует работу желудочных желез, что вырабатывают соляную кислоту в пищеварительный сок. В результате снижается кислотность в органе, отчего нарушается процесс пищеварения. Симптомы:
Признаком развивающейся инфекции может быть мигрень.
- метеоризм и взудите;
- боли в желудке (после еды или конкретной пищи);
- резкий запах и отрыжка из ротовой полости;
- белый налет на языке;
- беспричинные мигрени;
- появление грибка, проблем с ногтями.
Часто беременные списывают эти признаки на проявление своего положения и вовремя не обращаются к специалисту. Если ранее был диагностировать хронический хеликобактер-ассоциированный гастрит, то в первом триместре это оборачивается сильным и длительным (до 17-ти недель) токсикозом: тошнотой, рвотой, слабостью и сонливым состоянием.
Методы диагностики
Быстрая, а главное — правильная постановка диагноза необходима, поскольку хеликобактер меняет протекание беременности и влияет на психологические моменты жизни женщины. При диагностике этой болезни у беременных женщин предусматривает исключение инвазивных методов для ограждения ее от излишних стрессов и переживаний. Изначально ориентируются на данные по анализам крови, кала и мочи на присутствие в образцах антигенов и антител к хеликобактерии. В крайнем случае возможно проведение желудочного зондирования с забором образца пищеварительного сока на проверку уровня рН. Показания к проведению определяет врач, потому как есть риски осложнений из-за естественного изменения положения органов по мере роста матки.
Лечение хеликобактериоза
Будущей маме можно есть мясо в отварном виде.
Главным методом избавления от этого недуга является строгая диета. Рацион у беременных женщин должен состоять из разнообразия полезных продуктов. Предпочтение нужно отдавать отварному мясу, рыбе, постной ветчине, кашам, нейтральным фруктам и овощам. Пища должна быть свежеприготовленная, питание — дробное, но частое
Важно обильное питье, желательно употребление оговоренных с врачом минеральных вод. Беременным стоит воздержаться от сладостей, поскольку излишек сахара и углеводов являются излюбленной средой для обитания хеликобактерии
Агрессивное лечение женщин в положении запрещено, поэтому врач подбирает разрешенные препараты, максимально безопасные для плода. Используются лекарства на растительной основе, антациды (для снижения рН желудка), противовоспалительные и обезболивающих препаратов (для снятия симптоматики). Цели лечения — максимально облегчить состояние беременной и не дать бактерии распространиться на весь кишечник. После родов показана интенсивная терапия.
Чем опасна хеликобактерия?
Болезнь становится серьезной помехой для женщин со слабым иммунитетом, так как продукты распада в результате жизнедеятельности бактерии усиливают токсикоз, ухудшают протекание беременности. Но противопоказанием к зачатию хеликобактериоз не считается, на развитие ребенка бактерия не влияет. Она доставляет проблемы лишь матери, поэтому чем лучше мать чувствует себя во время беременности — тем здоровее будет кроха.
Методы профилактики
При планировании беременности любая мама должна понимать все риски, связанные с болезнью в хронической форме. Здоровый образ жизни, диета, отсутствие стресса, физической и моральной нагрузки позволяет избежать обострения патологии и не спровоцирует ослабление иммунитета. Хеликобактер при беременности способен быстро размножаться, заселяя все отделы ЖКТ, поэтому перед зачатием нужно пройти полное обследование, подлечить хронические патологии.
Анализ кала ПЦР на хеликобактер пилори
Это наиболее распространённый метод исследования фекалий на данную бактерию, обладающий высокой точностью.
Суть способа в следующем:
Из биологического материала пациента выделяется участок ДНК бактерии, который затем многократно искусственно дублируется на специальном аппарате, так происходит восстановление гететического кода Н.руlori
Когда геномный фрагмент микроба достигает достаточных размеров, его сравнивают с эталонным и делают вывод об исследуемом микроорганизме: хеликобактер ли это или другой патоген.
Положительный ПЦР анализ означает наличие в организме человека хеликобактерной инфекции: бактерия присутствует в желудке, ее фрагменты ДНК обнаружены в кале и совпали с эталонными.
Достоинства ПЦР-метода:
- Высокая точность: даже незначительного количества генетического материала достаточно для исследования с большим процентом достоверности, приближающимся к 99%.
- Быстрота исследования. 2 суток достаточно для анализа, но существуют экспресс-способы, позволяющие установить диагноз за несколько часов.
- Безболезненность. Способ атравматичен, неинвазивен. Позволяет обследовать маленьких детей, пожилых, ослабленных пациентов, которым противопоказана ФГДС с биопсией и другие эндоскопические манипуляции.
- Для точного результата не обязательно обнаружение ДНК-фрагментов именно S или спиралевидных форм, части кокковых микробов (наиболее встречающихся в испражнениях) тоже подходят для анализа.
У ПЦР-диагностики значительно больше плюсов, чем минусов. К недостаткам можно отнести:
- Относительно высокую стоимость анализа.
- Сохранение фрагментов ДНК микроба в фекалиях и после эрадикации. Даже если лечение успешно пройдено и бактерия отсутствует в организме, ещё спустя какое-то время фрагменты ДНК обнаруживаются в биологическом материале и стул тест на хеликобактер может дать положительный результат. Поэтому с целью контроля излеченности рекомендуется ПЦР-диагностика не ранее, чем через 1 месяц после окончания терапии.
- Специальная дорогостоящая высокотехнологичная аппаратура, для работы на которой необходим подготовленный и обученный персонал.
Мнение специалистов
Бывают ситуации, когда результат анализа превышает норму хеликобактер пилори в крови, но пациент хорошо себя чувствует и не имеет эрозивно-язвенных проявлений по результатам ФГДС. Чаще всего такие потенциальные больные отказываются от лечения, но мнение клинических специалистов двояко.
Необходимость эрадикации хеликобактерной инфекции не оставляет сомнения, если пациента мучает гастрит или язва, которые в перспективе могут озлокачествиться.
Эффективность такого лечения часто ставится под сомнение, и это действительно представляет собой проблему. Каждые 5 лет ученые со всего мира собираются для обсуждения этой сферы здравоохранения. В процессе семинара выясняют:
- Лечебную тактику.
- Новые сочетания антибиотиков.
- Методы диагностики и профилактики.
По окончанию съезда каждая страна получает новые руководства к действию.
В настоящий момент полное выздоровление пациентов с наименьшим числом рецидивов дает терапия двумя антибиотиками в сочетании с метронидазолом и любым антацидом. В качестве профилактических мер рекомендуют:
- тщательно соблюдать личную гигиену;
- иметь индивидуальную щетку;
- не курить одну сигарету на несколько человек;
- не делиться своей губной помадой;
- не брать от других надкусанные фрукты, овощи или сладости.
Довольно простые правила помогут избежать опасного заражения. Но при малейшем ухудшении самочувствия необходимо срочно обращаться к врачу для своевременной диагностики и терапии.
Методы диагностики хеликобактер пилори: анализ крови на антитела, анализ кала методом ПЦР, уреазные тесты (при ФГДС, дыхательный), биопсия с цитологией
Подготовка включает в себя следующее:
- накануне исследования ИФА запрещено употреблять алкоголь, жирную пищу;
- за день исключают физические нагрузки;
- сдать кровь необходимо до завтрака, утром разрешается пить воду;
- интервал между последним приёмом пищи и тестированием – не менее 8–10 часов.
- сдавать анализ нужно до начала применения лекарств (по возможности) или не раньше 8–14 дней после завершения терапии. Если лечение проводится, то в направлении на анализ указывается перечень принимаемых лекарственных препаратов и дозы.
Широкую популярность приобретают экспресс-тесты в диагностике бактерии. Они достаточно информативны, позволяют быстро установить инфицированность Н.руlori в течение нескольких минут после проведения ФГДС. Это экспресс-уреазные тесты.
Они основаны на способности микробного фермента уреазы расщеплять мочевину с выделением аммония. Ионы аммония создают щелочную среду, и способствует смене цвета индикатора экспресс-системы.
В одноразовый экспресс-набор входит:
- мочевина
- индикатор РН (изначально его цвет жёлтый)
- бактериостатический агент
При проведении ФГДС производится забор участка слизистой. Данный участок помещается на панель экспресс-набора. Если данная слизистая содержит микроб, его фермент уреаза начинает активно расщеплять содержащуюся в тесте мочевину.
Если смены окраски индикатора не произошло, или оно появилось спустя сутки – результат считается отрицательным. Патогена в биоптате нет.
Необходимо пройти лицам, которые:
- Имеют симптомы патологии желудочно-кишечного тракта: изжогу, тошноту, дискомфорт или боли в эпигастрии, металлический привкус во рту
- Имеют тесный контакт с лицами, у которых уже диагностирована данная инфекция, либо среди членов семьи данный диагноз установлен
- В анамнезе уже имеют гастрит, эзофагит, язву без установленной этиологии
- Прошли курс эрадикационной терапии по поводу данной инфекции для оценки качества лечения
- Имеют проблемы кожи неустановленной этиологии, иммунные нарушения
- Успешно прошли лечение от Н.руlori с достоверно подтверждёнными лабораторными данными, для профилактики реинфекции 1 раз в год.
Какие анализы нужно сдать на хеликобактер пилори
В настоящее время способов обнаружения бактерии, продуктов её жизнедеятельности и антител к ней великое множество. Каждый из методов имеет определённые достоинства и недостатки.
Поэтому пациенту рекомендуется сдавать несколько анализов для подтверждения наличия микроба в организме, порекомендовать их должен врач, с учетом конкретного клинического случая и технической оснащённости учреждения, в котором будет проводится диагностика.
Каждому пациенту необходимо пройти ФГДС с биопсией. Далее изучение биоптированной слизистой возможно под микроскопом, экспресс-тестами, либо путем культивированием бактерий на питательных средах.
Не лишним будет сдать кровь и кал для серологической диагностики. Ведь подтверждением инфекции может стать высокий титр антител бактерии или её ДНЕ-фрагменты в испражнениях.
Дыхательный тест – прекрасный неинвазивный способ, позволяющий достоверно подтвердить наличие в организме бактерии и ее активность. И если есть возможность пройти его в лечебном учреждении, следует обязательно её воспользоваться.
Анализы на хеликобактерную инфекцию сдают не только для выявление микроорганизма, но и с целью контроля излеченности. Какие именно нужны исследования, всегда определяет врач.
Какой анализ на хеликобактер пилори самый информативный
Точными анализами являются:
- цитологический метод, когда врач наблюдает наличие бактерии под микроскопом
- культуральный метод – выращивание бактерий на питательных средах
- метод ПЦР-диагностики или молекулярно-генетический – обнаружение генов или ДНК-фрагментов бактерии
Все эти методы основаны на первоначальном взятии биоптата – кусочка слизитой желудка при проведении ФГДС. Они являются инвазивными. Без «глотания трубки» данные методы провести невозможно.
В отличие от методов серологического исследования крови, при котором выявляются антитела, которые косвенно свидетельствуют о нахождении в организме микроба или ферментных методов, которые способны диагностировать продукты его жизнедеятельности, цитология выявляет патогена целиком, собственной персоной.
Мазки высушиваются, окрашиваются специальными красителями и изучаются под микроскопом. Бактерии располагаются в слизи, они S-образной или спиралевидной формы, имеют жгутики на конце тела. Опытный глаз врача-диагноста не спутает данные микроорганизмы с любыми другими.
Культуральный метод позволяет вырастить целую колонию бактерий на специальных питательных средах. Патогены любят среду с низким содержанием кислорода (не более 5%), для их выращивания используют кровяные питательные среды.
При благоприятных условиях, соблюдения температурного режима при культивировании и анаэробных условий, через 3-5 суток на среде вырастают круглые, прозрачные колонии бактерий, которые далее подвергаются идентификации.
ПЦР-методы обнаружения генов и фрагментов хеликобактерных ДНК является информативным, но требует специального оборудования и реактивов. Им располагает не каждое поликлиническое учреждение на сегодняшний день.
Врачи рекомендуют для выявления Н.руlori целью наибольшей информативности использовать три, а лучше четыре метода диагностики: цитологический, культуральный, ПЦР, дыхательный тест.
Какой анализ лучше всего сдать на хеликобактер
Перечень анализов должен определит врач с учетом конкретного случая и цели исследования.
С профилактической целью без жалоб со стороны органов ЖКТ можно воспользоваться неинвазивными методами диагностики (без ФГДС):
- анализ крови для серологического выявления антител к микробу
- анализ кала для ПЦР-диагностики фрагментов ДНК
- дыхательный тест
Также неинвазивные методы рекомендованы после проведения лечения с целью уточнения его эффективности, ослабленным, тяжелобольным пациентам, которым нельзя сделать зонд и произвести инвазивные способы диагностики.
Если имеются жалобы со стороны органов ЖКТ или подозрения на инфицирование – обязательно проведение ФГДС с последующим взятием участка слизистой желудка. В этом случае рекомендованы цитологический, культуральный, уреазный экспресс-тест или ПЦР-диагностика биоптата.
«Золотого стандарта» диагностики микроба не существует. Все методы дополняют друг друга, поэтому использовать нужно несколько из них. Выбор и тактика диагностики – прерогатива лечащего врача.
Анализ крови на хеликобактер пилори
Иммуноферментный анализ на бактерию хеликобактер пилори (записаться) представляет собой исследование плазмы крови, во время которого с помощью специальных химических реакций определяют концентрацию (титры) антител к возбудителю хеликобактериоза.
Дело в том, что при попадании в организм генетически чужеродного белка, каковым является хеликобактер пилори, включаются сложные иммунные механизмы защиты, среди которых образование антител, предназначенных для ликвидации «чужака».
Однако следует помнить, что для появления выраженного иммунного ответа необходим определенный промежуток времени, так что антитела к инфекции появляются через некоторое время после заражения.
Поэтому возможны ложнонегативные результаты анализа, когда болезнетворный микроб уже проник в человеческий организм, но иммунная система еще не успела ответить должным образом.
С другой стороны, специфические антитела сохраняются еще некоторое время (а иногда и пожизненно) после полной элиминации инфекционного агента из организма. Поэтому возможны ложнопозитивные результаты у уже выздоровевших людей.
Чтобы хотя бы частично преодолеть недостатки исследования, используется фракционный анализ иммуноглобулинов (IgG, IgM и IgA), которые представляют собой разные виды антител, вырабатываемых клетками иммунной системы.
Антитела IgG представляют собой иммуноглобулины самого распространенного класса G (до 75% от всех видов иммуноглобулинов). Это вещества белковой природы, которые начинают вырабатываться через три-четыре недели после проникновения инфекции в организм.
При хеликобактериозе концентрация IgG в плазме крови коррелирует с активностью инфекционного процесса и постепенно снижается после эрадикации хеликобактер пилори из организма.
Иммуноглобулины типа М представляют собой немногочисленную фракцию относительно крупных белков (самые крупные антитела, которые, однако, составляют всего 10% от всех видов иммуноглобулинов). Данный тип антител обнаруживается в крови пациента после заражения хеликобактериозом значительно раньше, чем иммуноглобулины типа G (IgG).
IgА называют секреторным иммуноглобулином. Антитела к хеликобактер пилори типа А могут обнаруживаться не только в крови, но еще и в слюне, и в желудочном соке. Их появление свидетельствует о высокой активности процесса.
Различают количественное и качественное определение антител IgG, IgA и IgМ к хеликобактер пилори в плазме крови. При качественном определении в норме антител к хеликобактер пилори нет. В таких случаях в медицинских документах записывается: «анализ на антитела к хеликобактер пилори отрицательный».
При количественном определении антител IgG, IgA и IgМ к хеликобактер пилори используются так называемые референтные значения, нормы которых отличаются в зависимости от лаборатории, в которой производят исследование.
При этом на бланке результатов анализа всегда проставляются цифры, регламентирующие норму и патологию для референтных значений антител к хеликобактер пилори.
В некоторых лабораториях выделяют также показатели, при которых результат исследования на хеликобактер пилори расценивается как сомнительный. В таких случаях врачи советуют повторить сдачу анализа через 2-3 недели.
ИФА заключается в исследовании сыворотки крови и определении титров антител (концентрации), наличие которых является показателем инфицированности человека хеликобактериозом. Они образуются в ответ на внедрение генетически чуждых белков, в этом случае – на микроорганизм Helicobacter pylori.
Образование антител – часть природных механизмов защиты, нацеленной на ликвидацию патогенов. Если в крови при исследовании обнаруживают антитела, это означает, что иммунная система среагировала на присутствие в организме вредоносного микроорганизма.
Более точные данные получают при проведении исследования титров трёх иммуноглобулинов A, M, G:
- антитела класса IgG к Helicobacter pylori работают маркером, подтверждающим наличие в организме бактерии. Иммуноглобулины этого типа обнаруживаются с третьей – четвёртой недели после заражения. Но высокие показатели титров IgG удерживаются месяцами уже после выведения возбудителя;
- антитела IgМ – показатель раннего инфицирования. Они, как и IgА, обнаруживаются достаточно редко. Их наличие сигнализирует о начавшейся ранней инфекции и о выраженном воспалительном процессе на слизистой.